4×和5×的上样缓冲液的区别就是加样的比例不一样。
4×上样缓冲液使用方法：1、按每30微升蛋白样品加入10微升上样缓冲液的比例(4倍稀释)来使用。如果蛋白浓度过高，可用双蒸水稀释。
2、混匀后，100℃水浴加热5-10分钟，使蛋白变性。
3、冷却至室温后，10000-14000rpm离心2-5分钟，取上清直接上样电泳即可。5×上样缓冲液使用方法： 1. 在室温或不超过37℃的水浴中溶解SDS-PAGE上样缓冲液(5X)。水浴溶解后立即室温存放，尽量避免长时间置于水浴中。2. 按照每4微升蛋白样品加入1微升蛋白上样缓冲液(5X)的比例，混合蛋白样品和蛋白上样缓冲液(5X)。3. 100℃或沸水浴加热3-5分钟，以充分变性蛋白。4. 冷却到室温后，直接上样到SDS-PAGE胶加样孔内即可。5. 通常电泳至蓝色染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。
DNA分子在高于其等电点的pH溶液中中带负电,因为所说的等电点是指蛋白质或两性电解质所带净电荷为零时溶液的pH,此时蛋白质或两性电解质在电场中的迁移率为零.当外界溶液的pH大于两性离子的等电点值,两性离子释放质子带负电；当外界溶液的pH小于两性离子的等电点值,两性离子质子化带正电.
DNA在碱性条件下（pH8 0的缓冲液）带负电荷，在电场中通过凝胶介质向正极移动，不同DNA分子片段由于分子和构型不同，在电场中的泳动速率液不同。
Tris-HCl，中文别名：三羟甲基氨基甲烷盐酸盐；Tris盐酸盐，英文名称：TRIS hydrochloride
Tris-HCl缓冲液（0.05mol/L，25℃）
50ml 0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与x ml 0.1mol/L 盐酸混匀后，加水稀释至100ml
Tris缓冲液不仅被广泛用作核酸和蛋白质的溶剂，还有许多重要用途。Tris被用于不同pH条件下的蛋白质晶体生长。Tris缓冲液的低离子强度特点可用于线虫（C. elegans）核纤层蛋白（lamin）的中间纤维的形成。Tris也是蛋白质电泳缓冲液的主要成分之一，其在电泳缓冲液中与甘氨酸构成缓冲体系，稳定电泳过程中的pH。此外，Tris还是制备表面活性剂、硫化促进剂和一些药物的中间物。Tris也被用作滴定标准物。 作为蛋白缓冲液时，若后续工作需要质谱，则不适宜用Tris，最好换成其他质谱仪可耐受的缓冲液
TAE是使用最广泛的缓冲系统。
其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量（TBE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量），且双链线状DNA在其中的迁移率较其他两种缓冲液快约10%，电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离。缓冲液在电泳过程中的一个作用是维持合适的pH.电泳时正极与负极都会发生电解反应,正极发生的是氧化反应（4OH--4e-2H2O+O2),负极发生的是还原反应（4H++4e-2H2),长时间的电泳将使正极变酸,负极变碱.一个好的缓冲系统应有较强的缓冲能力,是溶液两极的pH保持基本不变.
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