根据需要扩增的目的基因片段大小，以及所用试剂盒或者酶来调整。
PCR就是聚合酶链式反应。再外界情况下完成对核算片段的迅速合成。主要成分：有两端引物，Taq DNA聚合酶 模板DNA 合成DNA的核苷酸。主要程序：
1。模板DNA的变性，两条链解开。
2。引物模板退火，二者碱基配对
3。DNA聚合酶以四种核甘酸为底物，在引物引导下合成和模板互补的DNA新链。
4。重复此过程。
96位拷贝是指对一个数据进行96次复制，每次复制都会略微不同，这样可以增加数据的安全性和减少被破解的可能性。在信息安全领域中，数据的安全性始终是一项重要任务。在数字世界中，人们需要传输和存储大量的敏感信息，例如个人身份证信息、金融数据、商业机密等。为了保护这些信息不被窃取或篡改，采取相应的安全技术措施显得至关重要。
在这方面，96位拷贝技术被广泛运用，其核心就是对数据进行多次拷贝，每次拷贝复制的数据都存在微小的变化，从而增加破解的难度。总之，96位拷贝是信息安全领域中的一项重要技术，可以提高数据的保密性、完整性和可靠性。
计算退火温度的方法：
1. 退火温度＝4×（G＋C）＋2×（A＋T）－（5～8） 只是粗算，有时不灵，但比较简便。
2.用primer5（or oligo6）计算，引物配对好后，primer5可以显示Tm，我认为这个值就是退火温度，我的经验再加2 or 3度最好。
3.合成引物的单子上也有个Tm，减去5～8也可，但有些公司提供的Tm就是方法1计算的。
1、在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2、调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，最后在72℃ 保温7min。
3、结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4、PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
如果没有杂带，只是目的条带不亮，就不是特异性问题，而是扩增效率较低。可能是引物结合不好，或者两个引物退火温度差异过大等原因。可以先试一试降低退火温度，增加循环数。提高模板浓度，或回收后再次扩增也可以试一试。如果要求不是很高，这样优化一下就差不多了。
一）试剂PCR仪
1.引物：决定扩增的特异性。根据检测的DNA不同，选用不同引物，每种病原微生物都有自己特异的引物。
2.耐热的DNA聚合酶：此酶是从耐热细菌中分离出来的，能耐受高温90℃-100℃。
3.10×PCR缓冲液：500mmol/l KCl;100mmol/L Tris-HCl（pH8.4,20℃）150mmol/L MgCl2,1mg/ml明胶。10×PCR缓冲液随酶一起购买。
4.5mmol/L dNTP贮备液：将dATP、dCTP、dGTP和dTTP钠盐各100mg合并，加入灭菌去离子水溶解，用NaOH调pH至中性，分装每份300μl，-20℃保存。dNTP浓度用UV吸收法测定。现用dNTP溶液均有商品化产品。
5.DNA模板：用处理液将待测标本处理，不同处理方法、操作各异，但目的是暴露标本中被检测的DNA。
内标的作用是一个参考意义，因为理论上来说，不管在任何细胞，任何组织中内标的表达量是一致的。
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